悠洋棋牌下载

当前位置:
悠洋棋牌下载 > 技术文章 > 高纯度质粒小量快速提取试剂盒
目录导航 Directory
服务热线
技术支持Article
高纯度质粒小量快速提取试剂盒
点击次数:132 发布时间:2019-04-16

高纯度质粒小量快速提取试剂盒

HighPure Rapid Mini Plasmid Kit

保存条件:本试剂盒在室温储存 18 个月不影响使用效果。产品介绍:

本试剂盒采用改进 SDS-碱裂解法裂解细胞,离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低

pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA,再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除,最后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅基质膜上洗脱。

产品特点:

  1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
  2. 独有的去蛋白液配方,可以高效去除残留的核酸酶,即使是核酸酶含量丰富的菌株JM 系列、HB101 也可以轻松去除。有效防止了质粒被核酸酶降解。


 

  1. 快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯防等试剂,也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好, 可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

注意事项:

  1. 第一次使用时,将试剂盒所带的全部 RNase A 加入溶液 P1 终浓度 100ug/ml置于 2-8℃保存。如果溶液 P1 RNase A 失活,提取的质粒可能会有微量 RNA 留,在溶液 P1 中补加 RNase A 即可。
  2. 环境温度低时溶液 P2 SDS 可能会析出浑浊或者沉淀,可在 37℃水浴加热几 min, 即可恢复澄清,不要剧烈摇晃,以免形成过量的泡沫。
  3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化。
  4. 溶液 P3 和去蛋白液 PE 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
  5. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒,建议种单菌落于 1.5-4.5ml 加合适抗生素的 LB 培养基, 过夜培养 14-16 个小时,可提取出多达 20µg 的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于 10kb 的大质粒,应适当加大菌体使用量,使用 5-10ml 过夜培养物,同时按比例增加 P1P2P3 的用量,其它步骤相同。
  6. 得到的质粒 DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260 1 相当于大约 50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可能为 2 条或者多条 DNA 条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超90%。
  7. 洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保 pH 大于 7.5pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-20℃。质粒DNA 如果需要长期保存,可以用 TE 缓冲液洗脱10mM Tris-HCl1mM EDTApH 8.0,但是 EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

自备试剂:无水乙醇操作步骤:

提示:

ð 第一次使用前请先在漂洗液 WB 和去蛋白液 PE 瓶中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

ð RNase A 全部加入溶液 P1 中,混匀,每次使用后置于 2-8℃保存。


 

ð 将溶液 P3 放在冰上预冷,可以提高产量。

  1. 向吸附柱AC 吸附柱放入收集管中500μl 的平衡液BL,12,000rpm  离心 1 min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
  2. 1。5-4。5ml 过夜培养的菌液,12,000rpm 离心 30 sec,尽可能的倒干上清,收集菌体。收集超过 1.5 ml 菌液, 可以离心弃上清后,在同一个 1。5ml 管内加入更多的菌液,重复步骤 1,直到收集到足够的菌体。
  3. 250μl 溶液 P1 重悬菌体沉淀,涡旋振荡至彻底悬浮。
  4. 250μl 的溶液 P2,温和地上下翻转 4 -7 次使菌体充分裂解。
  5. 350μl 溶液 P3,立即温和地上下翻转 4 -7 次,充分混匀时会出现白色絮状沉淀,

13,000rpm 离心 10 min,小心取上清。加入溶液 P3 后应该立即混匀,以免产生 SDS

的局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清

  1. 将上一步所得上清加入吸附柱 AC 吸附柱放入收集管中12,000rpm 离心 30-60

sec,倒掉收集管中的废液可选步骤:加入 500μl 去蛋白液 PE12,000rpm 离心 30-60

sec,弃废液。此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质,如所用菌株为 JM 系列、HB101 endA 菌株或野生型菌株,核酸酶含量丰富,应加此步骤;如所用菌株为 XL-1 Blue DH5α等缺陷型菌株,核酸酶含量低,则可略过此步骤。

  1. 加入 500μl 漂洗液 WB请先检查是否已加入无水乙醇!12,000rpm  离心 30 sec,弃掉废液。
  2. 重复步骤 7
  3. 将吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 min,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。                                              10。取出吸附柱 AC,放入一个干净的离心管中,室温放置几分钟。

11。在吸附膜的中间部位50μl-100μl 洗脱缓冲液 EB洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好,室温放置 2 min12,000rpm  离心 1 min。如果需要较多量质粒,

可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心 1 min。洗脱体积越大,洗脱效率越高。如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于 50μl, 体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量。若用ddH2O 做洗脱液,应保证其 pH 值在 7。0-8。5 范围内,pH 值低于 7。0 会降低洗脱效率。

 

联系人
在线客服
用心服务成就您我
上海11选5走势图 易玩棋牌 悠洋棋牌 悠洋棋牌 悠洋棋牌 上海11选5走势图 悠洋棋牌 悠洋棋牌APP下载 上海11选5APP 上海11选5开奖结果
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站