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卡那霉素酶联免疫试剂盒说明书
点击次数:194 发布时间:2019-04-25


 

 

卡那霉素酶联免疫试剂盒说明书

 

 

药物概述及检测原理

 

卡那霉素是氨基糖甙类药物,被广范应用于动物疾病的治疗,由于其具有神经毒性和肾脏毒性,欧美国家及我国均要求其限量使用。

本公司的卡那霉素酶联免疫试剂盒使用新一代生物技术开发,具有方便、快速、灵敏等特点

本试剂盒利用卡那霉素抗体与卡那霉素可产生特异性结合的性质,先在酶标板上预包被抗原,再加入标准品(样本)和卡那霉素抗体工作液,样本或标准品中的卡那霉素药物与包被抗原竞争卡那霉素抗体,最后加入底物催化显色。此时显色深度与标准品(样本)中卡那霉素药物的含量成反比。

 

  • 试剂盒内包含组分:

 

  1. 标准品工作液:0 ppb、0.2 ppb、0.6 ppb、1.8ppb、5.4 ppb、16.2ppb,
  2. 1 mL/瓶
  3. 96孔酶标板:1块
  4. 卡那霉素抗体工作液:1瓶(7mL/瓶
  5. 酶标二抗工作液:1瓶(7mL/瓶
  6. 20×浓缩洗涤液:1瓶(30 mL/
  7. 20×浓缩组织复溶液:1瓶(10 mL/
  8. 10×浓缩蜂蜜复溶液:1瓶(10 mL/
  9. 底物A液1瓶(7 mL/瓶
  10. 底物B液1瓶(7 mL/瓶
  11. 终止液:1瓶(7mL)
  12. 说明书
  13. 盖板膜
  • 用户需要自备的设备和试剂

 

仪器

  1. 酶标仪(检测波长450 nm630 nm)
  2. 电子天平(精度:0.01 g)
  3. 离心机(4000 g及以上
  4. 生化培养箱可调25℃)
  5. 摇床
  6. 旋涡振
  7. 微量移液器20μl-200μl、100μl-1000μl各一支、30-300ul八道排枪
  8. 计时器

试剂:试剂均为分析纯

  1. 氢氧化钠
  2. 氯化钠
  3. 氯化
  4. 磷酸二氢钾
  5. 十二水合磷酸氢二钠
  6. 去离子水

 

  • 试剂盒特异性

   试剂盒与其他药物的交叉反应率

  1. 卡那霉素………………………100%
  2. 大观霉素、链霉素、替米考星<0.1%

 

  • 样本检测步骤
  1. 工作液准备
  1. 组织复溶工作1份20×浓缩组织复溶去离子水19按照1:19的比例稀释即得
  2. 蜂蜜复溶工作1份10×浓缩蜂蜜复溶去离子水9按照1:9的比例稀释即得。
  3. 缓冲液: 0.1M PBS溶液(PH=10-11)  称取13.4g十二水合磷酸氢二钠.20g氯化钠.0.32g氢氧化钠.0.5g磷酸二氢钾.0.5g氯化钾加去离子水溶解定溶至500ml。
  1. 1 M盐酸溶液量取1ml浓盐酸加去离子水11ml溶解混匀即得
  1. 洗涤工作液1份20×浓缩洗涤液去离子水19份按照1:19的比例稀释即得
  1. 样品前处理

组织(鸡肉、猪肉)(稀释数:20

  • 称取1.0±0.05g均质样本至50ml聚苯乙烯离心管,加入3ml缓冲液见配液5.1),上下颠倒振摇5min
  • 放入60℃水浴环境中60min,取出4000g以上室温离心10min
  • 移取上清液100ul,加入400ul组织复溶工作液(见5.1中涡旋20s
  • 50ul用于分析

 

蜂蜜(稀释数:15

  • 精确称取1.0±0。05g蜂蜜样本至50ml塑料离心管中;
  • 加入2ml 去离子水,强烈震摇2min (或使用涡动仪涡动1min);
  • 取100μL上清液至400μL蜂蜜复溶工作(见5。1中,充分涡动30s;
  • 取50 μL液体进行分析。

   液态奶样本方法一(稀释数:10(同四环素液态奶方

   法一致)

  • 样好的液态奶样本解冻后于室温静置平衡30min以上;
  • 将枪头伸入原奶样本下层,小心取出1ml样本加入2ml离心管中注意:尽量不要取到上层的奶油);
  • 加入50μL 1M盐酸(见5.1强烈震摇1min (或使用涡动仪涡动30s);
  • 使用离心机室温4000 g以上离心10 min;
  • 取上层清亮液体50μL加入另一干净离心管中(注意:尽量不要取到最上层的奶油),再加入450μL组织复溶工作(见5.1,强烈震摇1min (或使用涡动仪涡动30s);
  • 取50 μL液体进行分析。

   液态奶样本方法二(稀释数:40(同四环素液态奶方法

   一致)

  • 精确50ul液态奶样品于1950ul组织复溶工作(见5.1中;
  • 充分涡动1 min混匀
  • 立即取50ul进行检测。

 

  1. 检测
  • 准备:要使用的酶标板条插入酶标板架上,并记录各标准品和样品的位置,为减小检测值波动建议做双孔平行实验(每个样本/标准品点两孔,未使用的酶标板条用自封袋密封后,保存于2-8℃环境中以防变质
  • 加样:向对应微孔中加入标准品工作液/样品溶液50 μL,向每孔中加入50 μL酶标二抗工作液,再向每孔中加入50 μL抗体工作液,
  • 孵育:轻轻振荡酶标板10 s,使孔内液体充分混匀,盖好盖板膜25℃避光反应20 min;
  • 洗涤:取出酶标板后小心揭开盖板膜,板孔中液体后,在每孔加 250 μL洗涤工作液,浸泡15-30s后倒掉洗涤工作液,然后再加入洗涤工作液重复洗涤3~4,将酶标板倒置于吸水纸上,用力拍干;
  • 显色:在每孔中加入100 μL 底物A和底物B混合液注:底物A液、底物B液必须按体积1:1充分混合,混合液在10 min内使用,切不可使用金属容器盛装、搅拌试剂以免底物变质失效)
  • 孵育:轻轻振荡酶标板10 s,使孔内液体充分混匀,盖好盖板膜25℃避光反应10 min;
  • 终止:在反应后的微孔中加入终止液50μL/孔,底物液由蓝变黄表明终止成功。
  • 读数:终止后的酶标板应在5 min内用酶标仪读数,建议使用450 nm、630 nm双波长读取酶标板吸光度值。
  1. 计算结果
  • 各标准品(或样品)的吸光度平均值B,零标(浓度为0 ppb的标准品)吸光度平均值B0以(B/B0100%各标准品(或样品)对应的吸光度的百分比:
  • 使用半对数系统代入标准品对应的吸光度的百分比,与标准品浓度拟合标准曲线。
  • 将待检样品吸光度的百分比代入拟合出的标准曲线方程中,可得出样品对应的浓度,最后乘以样品相应的稀释倍数,即可得出样品中检测物含量。

 

  • 试剂盒参数
  • 试剂盒灵敏度0.2 ppb
  • 标准曲线范围0.2 ppb-16.2 ppb
  • 板内变异系数:<5%
  • 板间变异系数:<15%
  • B0吸光度理想>0.8
  • 回收率90%±30%
  • 样品最低检测限:

    猪肉、鸡肉…………约6ppb

    蜂蜜…………………约5ppb

        液态奶样本方法一…约5ppb

        液态奶样本方法二10ppb

注:ppb=ng/mL或ng/g。

 

  • 分析限制

   本试剂盒为定量或半定量试剂盒,建议用于大量样本筛查分析若检测结果为阳性,建议使用仪器方法开展确证实验(如GC/MS、LC-MS/MS等)。

 

  • 试剂盒贮存条件
  • 试剂盒贮存温度为2-8℃,切勿冻存
  • 未使用完的酶标板条须密封保存2-8℃的环境中

 

  • 注意事项
  • 使用试剂盒前,请务必仔细阅读说明书。
  • 试剂盒使用前,需将盒内各组份置于实验台上回温至室温(25±2℃)(提示:约1 h)。
  • 试剂在使用前摇匀,混合时应避免出现气泡。
  • 枪头为一次性用品,为防止试剂交叉污染,检测过程中所用枪头不得重复使用。
  • 请勿使用过期试剂盒,不同批号试剂盒中的试剂不得混用。
  • 样品处理完毕后请立即分析,否则可能影响检测结果。
  • 底物A液、底物B液均为无色透明液体,若在使用前已变成蓝色或混合后立即变蓝,说明试剂已污染或变质。
  • 加样过程在保证精度的前提下一定要迅速,以免反应时间差对检测结果产生影响
  • 终止液中含有硫酸,若不小心溅上皮肤或衣物请立即用大量清水冲洗。若不慎入眼,请在彻底清洗后去医院检查

 

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