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样品去盐技术
点击次数:52 发布时间:2019-06-09

样品去盐技术

 

在免疫酶技术中,抗原、抗体、酶及酶标记抗体(或抗原)在分离与纯化过程中,常常会碰到去盐这一实验环节。经过去盐,蛋白质溶液中不必要的无机盐分子得以去除,从而使蛋白进一步纯化与稳定。常用的去盐技术如下:

1.透析

适用于体积不太大的蛋白质溶液,简单方便,效果理想但费时。

2.凝胶过滤

适用于体积中等的蛋白质溶液,简便快速,效果理想,但去盐后的蛋白质溶液体积增大较多。

3.超滤

适用于体积较大的蛋白质溶液,去盐速度快,同时具有浓缩作用,但由于膜吸附作用,样品丢失较多。

4.透析

实验室常用的去盐方法是透析法。

在透析法中所使用的透析袋,是一种斗透膜。半透膜具有使小分子或离子透过,而蛋白质分子不能通过的特性。将蛋白质溶液装入透析袋内,浸泡于蒸馏水中,由于膜内外可扩散离子浓度的差别,使蛋白质溶液中的无机盐分子向膜外蒸馏水中扩散。如果经常更换蒸馏水,则可将蛋白质溶液中的盐类分子全部除去,这就是半透膜的去盐透析原理。假若膜外不是蒸馏水而是缓冲液,可以经过膜内外离子的相互扩散,改变蛋白质溶液的无机盐成分,这就是半透膜的平衡透析原理。在离子交换层析前经常进行平衡透析处理。

半透膜透析去盐过程如下:

  • 依据样品量的多少,剪取一段半透膜,浸在蒸馏水中一段时间,然后再用蒸馏水冲洗。
  • 使用时,将半透膜一端折叠,封闭使之成底端,并用滴管加入蒸馏水检查是否漏水。
  • 在1000-2000ml大烧杯中注满水,烧杯口上搁置一玻棒。
  • 倒尽膜内蒸馏水,然后加入蛋白质样品液(不能装得太满,以免胀裂),用橡皮筋扎牢管的上端,悬挂在玻璃棒中央,放入蒸馏水烧杯中。
  • 将蒸馏水烧杯置于4℃冰箱中透析2-3天,每天换水3次以上。如果置于磁力搅拌器上搅拌透析,则去盐效果更好。要经常检查透析袋的扎口是否紧密,以防漏液。
  • 按不同样品要求去除不同无机盐离子,可用特定的指示剂测定最后透析用过的蒸馏水中是否还含有这种离子。

5.讨论

(1)蛋白质样品的浓度应透析后测定,因为经过半透膜透析,膜内渗透压高于膜外,水分子会进入膜内,所以在去盐以后,蛋白质溶液体积会相应增大。

(2)有时会在透析袋内发生沉淀,一般而言,通过离心去除并不影响蛋白质样品的性质。

 (3)透析袋在生理盐水中浸洗后,还可继续使用。

 

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