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细胞分离液的配置和使用的步骤来了解一下
点击次数:84 发布时间:2019-07-25
   细胞分离液是一种经过聚乙烯吡咯烷酮处理过的硅胶颗粒,经过高速离心后可形成连续密度梯度,由于Percoll扩散常数低,所形成的梯度十分稳定。分离液采用预先形成的密度梯度时可在低离心力(200~1000g)于数分至数十分钟内达到满意的细胞分离结果。此外,分离液不穿透生物膜,对细胞无毒害,因此广泛用于分离细胞、亚细胞成分、细菌及病毒,还可将受损细胞及其碎片与完好的活细胞分离。常用于分离和传话植物原生质体、核、叶绿体、和线粒体。
  细胞分离液的配置与使用
  1、不同浓度(密度)分离液的制备:先用9份分离液与1份8.5%NaCl或1.5MPBS混合达到生理性渗透压,然后用生理溶液(0.85%NaCl或0.15MPBS)稀释到所需浓度。
  2、不连续密度梯度层的制备:先将试管壁用牛血清湿润,除去多余血清,这种预处理可使逐层叠加的液平稳沿管壁流下,使形成满意的界面。在制备过程中一般用长针头注射器从高密度向低密度逐层放置,有时相邻两层比重相差不大时,可将液放入注射器中,小针头斜面紧贴管壁,任其自然慢慢流下。
  3、装样:样品体积和细胞浓度根据不同细胞而异,一般加样体积不宜过大,细胞浓度也不可过高,否则会影响细胞的分离和回收。
  4、离心:一般采用离心力为400g,时间20~25min。由于多层之间密度差别不大,因此离心机加速、降速时要慢,要平稳。
  5、取样:当所要分离的细胞绝大部分在两层的界面时,可逐层去除液后收集界面部位的细胞;有时大部分细胞位于层中,则需要逐层收集。收获含有液的细胞经2次洗涤后可供培养或检测用。
  细胞分离液的优点
  渗透性低、不穿透细胞、密度高、无毒害,是目前较理想的介质。密度梯度离心已被多次成功地用于动物细胞及其细胞器的分离,纯化了包括人血液细胞、骨髓细胞、红血球细胞、白血球细胞、淋巴细胞、肝细胞等在内的十余种动物细胞。
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