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鸭乙肝表面抗原(HBsAg)ELISA 试剂盒说明书
点击次数:90 发布时间:2019-08-05

鸭乙肝表面抗原(HBsAg)酶联免疫分析(ELISA

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于检测鸭血清,血浆样本中乙肝表面抗原(HBsAg)水平。

实验原理

  本试剂盒用双抗体夹心酶联免疫(ELISA)测定标本鸭乙肝表面抗原(HBsAg)。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,可与样品中乙肝表面抗原(HBsAg)相结合,经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),与CUTOFF值相比较,从而判定标本中鸭乙肝表面抗原(HBsAg)的存在与否。

 

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1个

1个

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

阴性对照

0。5ml×1瓶

0。5ml×1瓶

2-8℃保存

阳性对照

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

酶标试剂

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保存

浓缩洗涤液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保存

 

样本处理及要求

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2。 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步骤

  • 编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)
  • 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。待测样品孔中加待测样本50μl加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,
  • 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外
  • 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  • 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用
  • 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  • 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟
  • 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
  • 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

结果判定:

  试验有效性:阳性对照孔平均值1.00; 阴性对照平均值0.20

  临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0。15

  阴性判定:样品OD值< 临界值(CUT OFF)者为鸭乙肝表面抗原(HBsAg)阴性

  阳性判定:样品OD值 临界值(CUT OFF)者为鸭乙肝表面抗原(HBsAg)阳性

注意事项

1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

  • 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸,使用时必须注意安全。

 

保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8。

2.有效期:6个月                  

                        

 

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