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总抗氧化能力试剂盒说明书可见分光光度法
点击次数:42 发布时间:2019-10-31

货号:YC2306                                                 规格:50管/48样

总抗氧化能力(Total antioxidant capacity ,T-AOC)

试剂盒说明书

可见分光光度法

注意:正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液,细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理

在酸性环境下,物质还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ的能力反映了其总抗氧化能力。

自备实验用品

可见分光光度计、恒温水浴锅、低温离心机、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体 60mL×1 瓶,使用前预冷。

试剂一:液体 50mL×1 瓶,避光保存。

试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂三:液体 5mL×1 瓶,避光保存。

样品的制备

(1) 血清、血浆、唾液或尿液样品

血浆(制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝,不宜使用 EDTA 抗凝)4℃,5000rpm 离心10min,取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定,也可以-80℃冻存(不宜超30 d)后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0。1g 组织,加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入1mL 提取液),冰浴超声波破碎(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

操作步骤

混合液(现配现用):将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合,使用前预温至 37℃ 。

 

空白管

测定管

混合液(μL)

900

900

样品(μL)

 

30

双蒸水(μL)

120

90

充分混匀,反应10min,双蒸水调零,1mL玻璃比色皿,测定593nm处吸光值,△A= A测定

-A空白

注意:空白管只需测定一次。

总抗氧化能力计算

1. 定义:样品的抗氧化能力以达到同样吸光度变化值(△A)所需的标准液离子浓度表示。

标准曲线为 y=0.6308 x +0.1291,R2=0.9989

2。 计算公式:

(1)按蛋白浓度计算

总抗氧化能力(U/mg prot)=1÷0.6308×(△ A-0.1291)× V 反总÷(V 样× Cpr)

=53。9×(△ A-0。1291)÷ Cpr

(2)按样品质量计算

总抗氧化能力(U/g)=1÷0.6308×(△ A-0。1291)× V 反总÷(V 样÷V 样总×W)

=53。9×(△ A-0。1291)÷ W

(3)按细胞数量计算

总抗氧化能力(U/104 cell)=1÷0。6308×(△A-0。1291)×V 反总÷V 样×V 样总÷细胞数量(万个)= 53。9×(△A-0。1291)÷ 细胞数量(万个)

(4)按液体体积计算

总抗氧化能力(U/mL)=1÷0.6308×(△A-0.1291)× V 反总÷V 样

=53。9×(△A-0。1291)÷ Cpr

V 样总:加入提取液体积,1 mL; V 反总:反应总体积,1。02mL;V 样:反应中样品体积,

0。03mL;W:样品质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL

注意事项

1. 试剂二对人体有刺激性,请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康,请穿实验服并

戴乳胶手套操作。

2。 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂,否则对本试剂盒的检测结果产生

干扰。

3。 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反

应的还原剂。

4。 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外,需把样品适当稀释或浓缩后再进行测

定。

5. 试剂盒 2-8℃保存。

 

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