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琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒说明书
点击次数:17 发布时间:2019-11-18

琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒

Midi Purification Kit

保存条件:本试剂盒在室温储存 18 个月不影响使用效果。

产品介绍:

在高离序盐存在的情况下,DNA 片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后用低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净 DNA 从硅基质膜上洗脱。产品特点:

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2。 使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

3. 溶胶液调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测 pH 值变化从而达到最理结合效果,大大提高回收效率。

注意事项:

1。 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。

2。 储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15-25℃)进行。

3。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

4. 溶胶液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

5。 回收纯化的DNA片段一般在100bp40kb之间,过长、过短片段的回收效率降低。

6。 回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-20μg, 100bp-5kbDNA片段,回收率可高达85%-95%

7. 切胶回收时,紫外灯观察对DNA片段有损坏作用,应该尽可能使用能量低的长波紫外线,并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。

8. pH≤7.5时,吸附膜吸附DNA的效率最高如果切下来的凝胶中含有电泳缓冲液太多,造成溶胶后溶胶液pH偏高,会导致回收率降低。溶胶后,如果溶胶液依旧保持黄色,说明pH正常;如果变成橘红色或者淡紫色,说明pH偏高,可在胶充分溶解后加5-10μl3M醋酸钠(pH5。2)将pH值调到5-7(黄色。

9. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA, 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱, 但应该确保pH大于7.5pH过低影响洗脱效率。用水洗脱,DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱10mM Tris-HCl1mM EDTApH 8.0,但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

自备试剂:无水乙醇操作步骤:

提示:第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

1. 在长波紫外灯下,用干净刀片将所需回收的 DNA 条带切下,尽量切除不含 DNA 的凝胶,得到凝胶体积越小越好。

2. 将切下的含有 DNA 条带凝胶放入 1.5ml 离心管,称重。

3。 3 倍体积溶胶液 DD凝胶重为 100mg,则加入 300μl 溶胶液)

如果凝胶浓度大于 2%,应加入 6 倍体积溶胶液。

4.   56℃水浴放置 10min(或直至胶完全溶解。每 2-3min 涡旋震荡一次加速溶解。

5. 可选,100mg 最初的凝胶重量加入 150μl 的异丙醇,震荡混匀。

6. 将上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中(吸附柱放入收集管中,室温放置 1min12,000rpm 离心 30-60sec,倒掉收集管中的废液。

7. 加入 500μl 漂洗液 WB  (请先检查是否已加入无水乙醇!,12,000rpm  离心 30sec,弃掉废液。

8. 重复操作步骤 7。

9. 将吸附柱 EC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2min,尽量去除漂洗液,以免漂洗液中残留的乙醇抑制下游反应。

10 取出吸附柱 EC,放入一个干净的离心管中,室温放置数分钟。

11.在吸附膜的中间部位滴加洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好,室温放置 2min,12,000rpm  离心1min。如果需要较多量 DNA,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心 1min。(注意:洗脱体积不应小于 30μl,体积过少影响回收效率)

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