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基因工程抗体及其功能试剂

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详细介绍

80年代后人们开始使用基因工程技术制备抗体,并进而将抗体分子片断与其它蛋白(或另一种抗体分子)融合得到多功能试剂,到目前为止,基因工程抗体在免疫测定上的应用尚处于一个初级阶段。且主要是将抗体与其它蛋白以融合蛋白形式表达而得到多功能试剂,如澳大利亚学者应用基因工程技术制备了抗人红细胞抗体与HIV-1gpN41的融合蛋白。这种重组蛋白,即基因工程双功能试剂,在此基础上,建立了快速,灵敏和特异的自身红细胞凝集试验(AGEN).
3.1  HIV-Elisa抗原/抗体试剂
1998年,美国首先研制第四代试剂,对检测HIV的同时检测P24(核心)抗原,故称HIV抗原/抗体试剂,国内已有引进.
抗原组成:gp160gp36gp170和单克隆抗p24抗体包被.
3.1.2 P24抗原测定
采用夹心法Elisa,即将将纯化的已知抗体包被,当加入带测血清后,若血清中含有P24与包被抗体形成抗原抗体复合物,再加入酶(HRP)标记HIV抗体。在抗原上又结合了酶标记的抗体,加底物 显色后在酶标仪上读结果。
近来为提高检测血清中P24抗原的敏感性,将血清中免疫复合物(ICD)解离后再进行测定。发展了(ICD) P24抗原测定技术。
3.1.3抗HIV-Elisa试剂
目前对HIV的检测原料有了较大改进,主要如下:
(1)可用于检测血清或血浆中HIV IgM亚特异性抗体和检测HIV-1、2和多种亚型。
(2)标记的抗原:
  a.含HIV-1B亚型gp41和P24的HIV-1重组融合蛋白。
  b.可特异性检测血清或血浆中HIV M群的抗体,绝大多数HIV-1.0群和HIV-2群的抗体。
  c.gp36免疫调控区的HIV-2多肽可测定特异性的HIV-2抗体。
  d.gp41的俩段HIV 1.0群多肽,可测特异性HIV 1.0 群的抗体 和HIV 1M群的抗体。
从以上抗原设计保证HIV的来自不同亚型/或区域的抗原亚型抗体的检测。减少了变异株的漏检。
HIV-1.0.2对759份各类临床样品包括401份HIV-1感染不同阶段病人样品,204分HIV-2感染不同阶段病人样品,和154份与HIV无关的其他疾病患者的样品的检测结果。
特异性:99.93%     灵敏度:100%
对欧洲血液中心的8842份常规鲜血者样品用HIV-1.0.2进行评价筛选,并经确认实验获得的结果。
3.1.4      HIV 确认试剂—免疫印记(WB或RIBA)试剂
判断标准
我国 HIV 抗体阳性:至少二条膜带(即gp160/gp120)或至少一条膜带和p24(核心)带同时出现
美国  HIV-1阳性(任何两个中有二条带(P24  gp41   gp120/gp160), HIV-2无阳性
WHO : HIV -1 阳性(不管有无核心带或酶带,    但有两条膜带)
              HIV-2阳性(不管有无核心带或酶带,单有两条膜带即为阳性)

基因工程酶及其融合蛋白
除了基因工程抗原、抗体外,与标记免疫测定有关的另一中重要的基因工程试剂就是酶及其融合蛋白,以重组酶建立免疫测定方法较为成功的是CEDIATM均相酶免疫试验。
使用基因工程酶技术生产免疫测定标记酶,是得到符合标记要求的高纯度酶的一条新途径,但如以其他蛋白(抗原或抗体)融合的方法,不但避免了繁琐且低效率的酶与蛋白的化学交联,而且无需得到纯化的酶和抗原或抗体。随着分子生物学技术的发展,将有越来越多的酶免疫测定方法建立在基因工程酶或其融合蛋白的基础之上。
发展趋势如下:
1)、由单一病原蛋白向多决定簇融合蛋白转变,并尽可能包括病原体基因组功能区的所有的能引起肌体免疫应答的决定簇。
2)、表达的抗原将尽可能少含有非特异性抗原 或共同抗原。
3)、为某一目的如病原体基因型确定而设计表达特定的多肽抗原片断。
总之,将围绕改善免疫测定的特异性和敏感性来制备基因工程片断。

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