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用细胞分离液分离组织中单核细胞方法
发布时间:2018-06-26 点击次数:533次
  用细胞分离液分离组织中单核细胞方法
 
  淋巴细胞分离液是一种根据细胞密度差异,借助离心产生的重力加速度,进行细胞的分离纯化的常用试剂。常用的淋巴细胞分离液有Ficoll淋巴细胞分离液、Percoll淋巴细胞分离液。Ficoll与Percoll分离单个核细胞的方法均为密度梯度离心法。淋巴细胞分离液是由聚蔗糖、泛影酸葡甲胺、氢氧化钠等配制成水溶液,经灭菌而成。用于分离全血中淋巴细胞。实验室常用的是用于分离人的淋巴细胞的试剂,如果需要分离其他动物如小鼠的淋巴细胞,也有专门的淋巴细胞分离液。
 
  用淋巴细胞分离液分离人组织中的单个核细胞方法:
  1.取外科分离的各种组织,用含1%庆大霉素和1%小牛血清的MEM培养液洗涤组织块,洗去可能的污染物。将组织块置培养皿中,加入约为组织块体积5~10倍的同样MEM培养液。用无菌外科剪刀将组织块剪碎成0.5mm3大小。
  2.将组织块转移到小培养瓶中,静置片刻,吸去培养液。加入约2倍组织块体积的、滤过除菌的酶溶液。37℃水浴摇床中消化1~2小时,注意组织块的消化程度。
  3.当组织块消化分散后,用手用力摇晃培养瓶3~5分钟或用大口吸管反复吹打,使细胞团进一步分散。加入30ml上述MEM培养液,终止酶反应。
  4.让上述悬液通过200目的金属网或尼龙网,分离单个细胞。用上述MEM培养液洗涤细胞3次,每次离心1000×g 10分钟。用1%台盼蓝染色法检测细胞活力并计数细胞。
  5.如果细胞量较多(>107),应当用上述淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,并用含10%小牛血清的细胞培养液将细胞配成适当浓度。

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