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利用CCK-8试剂盒试验的两种方法分享
发布时间:2019-04-14 点击次数:178次
   利用CCK-8试剂盒试验的两种方法分享
  在细胞培养实验过程中,大家是不是总会好奇别人家的实验总是做的又快又好,而自己做的实验又慢又难得做出自己满意的结果,搞得一天到晚也挺忙的,心想:我也很努力很认真啊,为啥效率总提不起来呢?
  其实,有时候并不是自己不努力,只是没有找对方法。做实验可不能光是埋头苦干,还要学会运用合适的检测试剂盒,这样就能事半功倍。
  如果你还在用MTT,那就真的OUT了,MTT花4小时才能得到的结果用CCK-8试剂盒只需1小时,CCK-8试剂盒可用于细胞增殖和毒性分析,同MTT法相比,CCK-8试剂盒即开即用,检测时间大概在1小时左右。
  不仅如此,CCK-8试剂盒对细胞的毒性极小,完全可以测完细胞增殖或药物毒性后再继续用细胞进行下游实验。下面小编就来为大家介绍一下CCK-8试剂盒的具体情况。
  CCK-8试剂盒基本原理
  基本原理为:该试剂中含有WST-8【化学名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】,它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物(Formazandye)。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
  CCK-8试剂盒产品用途
  主要用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。
  细胞毒性检测的实验对比
  CCK-8试剂盒的实验方法与步骤
  ☆实验一:细胞活性检测
  1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,96孔板每孔加入100μL,使待测细胞调密度至(1,000~10,000)/孔。
  2.5%CO2,37℃培养细胞24小时(培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异)。
  3.每孔加入10μLCCK-8试剂盒溶液。如果起始的培养体积为200μL,则需加入20μLCCK-8试剂盒溶液,其它情况以此类推。
  4.在细胞培养箱内继续孵育0.5~4小时,对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定(一般情况下,白细胞较难显色,因此需要较长的CCK-8试剂盒反应时间或增加细胞数量。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞,CCK-8试剂盒的培养时间一般为1~4小时,注意:CCK-8试剂盒的zui佳反应时间以具体显色的zui佳时间为准)。初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
  5.在450nm测定吸光度。
  ☆实验二:细胞增殖-毒性检测
  1.收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,96孔板每孔加入100μL,使待测细胞调密度至(1,000~10,000)/孔。
  2.5%CO2,37℃培养细胞24小时(培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异)。
  3.加入10μL不同浓度的待测物质,将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如6、12、24或48小时)。
  4.每孔加入10μLCCK-8试剂盒溶液。如果起始的培养体积为200μL,则需加入20μLCCK-8试剂盒溶液,其它情况以此类推。
  5.在细胞培养箱内继续孵育0.5~4小时,对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定(一般情况下,白细胞较难显色,因此需要较长的CCK-8试剂盒反应时间或增加细胞数量。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞,CCK-8试剂盒的培养时间一般为1~4小时,注意:CCK-8试剂盒的zui佳反应时间以具体显色的zui佳时间为准)。初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
  6.在450nm测定吸光度。

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