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CCK-8试剂盒实验原理和操作步骤详解
发布时间:2019-09-17 点击次数:175次
   CCK-8试剂盒实验原理和操作步骤详解
  Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐),CCK-8试剂盒适用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
  CCK-8试剂盒实验原理:
  WST-8属于MTT的升级产品,在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。
  CCK-8试剂盒用途:
  CCK-8法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增  殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
  CCK-8试剂盒用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。那么用于细胞毒性测定的操作步骤是什么呢?
  方法/步骤1:
  在96孔板中配制100μl 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时 (在 37℃,5% CO2 的条件下)。
  方法/步骤2:
  向培养板加入 10μl 不同浓度的待测物质。
  方法/步骤3:
  将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如: 6,12, 24 或 48 小时)。
  方法/步骤4:
  向每孔加入 10μl CCK8 溶液(Engreen) (注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 OD 值的读数)。
  方法/步骤5:
  将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。
  方法/步骤6:
  用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。
  方法/步骤7:
  如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μl 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。
  以上就是CCK-8试剂盒的相关使用说明,以供参考!

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