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ELISA检测e抗原灵敏度更高
发布时间:2013-12-19 点击次数:735次

ELISA检测e抗原灵敏度更高

 

E抗原是从乙肝表面抗原HBsAg)阳性血清中发现的一种新抗原,他可能与乙型肝炎的传染性有密切关系。李羽等报道用ELISA检测e抗原的灵敏度比琼脂免疫扩散法高150300倍。试验程序:

1.病人免疫球蛋白IgGe抗体)的提取:用饱和硫酸铵沉淀法处理上述抗体阳性人血清所得粗提液过柱(DEAE-Cellulose)收集IgG阳性部分,再穿流正常人血清柱。得IgGe抗体),浓缩为5ng/ml贮藏放于冰箱中。

2.酶标记IgGe抗体)的制备:用戊二醛二步法,将10mg  HRP交联5 mg  IgGe抗体),分装于小瓶,在低温(-20°C)下保存。

3.ELISAe抗原的检测:

a. IgGe抗体)包被聚苯乙烯微量反应板,在4°C过一夜(IgG浓度为25r/ml)。

b。洗涤3-5次。

c.加待检病员血清(1:10稀释,每份标本加两孔,每孔0。1ml,37°c孵育2h.

e.洗涤3-5次。

f.加酶标记IgGe抗体),37°C孵育2h(酶标记IgG稀释度为1:640)。

g.洗涤3-5次。

h。加底物与供氢体(H2O2OPD,置于暗处反应30min.

i.2mol/L硫酸终止反应。

j.每板均设阳性与阴性对照,根据不同的显色反应予以判断。

k。经过上诉方法检测初步确定为阳性的标本,取两份,一份加足量的e抗体血清,另一份加正常人血清,在37°C孵育1h,然后再按上述方法测定e抗原。加e抗原体血清者,在显色反应受到控制(与正常血清对比)时才可判断为e抗原阳性。


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