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石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤
石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤
更新时间:2020-02-20
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所属分类:病理学检测实验
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石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤产品概述:

石蜡包埋组织切片免疫染色实验步骤 

 

实验步骤(建议方案):

石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度

1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr;

2.脱蜡: 切片放入盛有二甲本苯的容器中脱蜡3次(即二甲本苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;

3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2次(每次2min),85%乙醇2 min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min;

4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O洗2×2min,TBS洗涤(2×2min)(具体修复方法见附1)* 注:有些抗原勿需修复,直接进入第5步封闭。

5.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育30 min;

6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜;

7.洗涤: TBS-T洗涤(3×5 min);

8.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育10 min;

9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育30 min;

10.洗涤: TBS-T洗涤(3×5 min);

11.封闭: 滴加试剂Tween 20,37℃湿盒孵育封闭20 min;

12.加HRP-SA: 滴加用抗体稀释液稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20 nM),37℃湿盒中孵育30 min;

13.洗涤: TBS-T洗涤(3×5 min),TBS洗涤(2×5 min);

14.显色:应用DAB溶液(试剂F)显色;

15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;

16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;

17.观察成像: 显微镜下观察成像。

注意事项:

1. 修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致结晶或抗原封闭。

2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使用。

3. 若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。

4. 封片前一定要换用TBS充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween 20,否则会影响结果观察。

5. 如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封片。

 

收费标准服务周期提供结果:

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